Cwiczenie nr 4.pdf

(46 KB) Pobierz
Ćwiczenie
nr 4
(21-24.10.2013)
Nieswoista odporność humoralna. Drogi aktywacji dopełniacza. Funkcje biologiczne
dopełniacza. Odczyn wiązania dopełniacza.
I. Seminarium
Nieswoista odporność humoralna
Ró nice między nieswoistą i swoistą reakcją obronną organizmu
Cząsteczki uczestniczące w mechanizmach odporności humoralnej wrodzonej:
białka ostrej fazy, lizozym, kolektyny, białka peptydowe.
Układ dopełniacza (drogi aktywacji, funkcje biologiczne, białka regulatorowe)
Odczyn wiązania dopełniacza
II.
Ćwiczenie
Sprawdzian wiadomości
Demonstracja
1. Układ dopełniacza – animacja komputerowa
2. Immunodyfuzja pojedyncza radialna (ilościowe oznaczanie składowych dopełniacza,
białek ostrej fazy)
3. Odczyn wiązania dopełniacza
4. Oznaczenie stę enia lizozymu metodą płytkową
Do wykonania:
1. Odczyn lizy serologicznej:
do wystąpienia lizy serologicznej konieczne są trzy składowe:
- komórki (np. krwinki owcy)
- swoiste dla antygenów krwinki przeciwciało
- dopełniacz
wykonanie odczynu:
do probówek odmierzyć po 250µl:
do I probówki: krwinek owcy, amboceptora, dopełniacza
do II probówki: krwinek owcy, amboceptora, roztworu NaCl
do III probówki: krwinek owcy, roztworu NaCl, dopełniacza
probówki nale y inkubować w 37°C
amboceptor – królicza surowica hemolityczna przeciwko erytrocytom owcy
2.
Oznaczanie stę enia lizozymu w surowicy metodą płytkową
a. do 50ml 2% płynnego roztworu agarozy nale y przenieść zawiesinę
Micrococcus
lysodeicticus
b. agarozę z zawiesiną szczepu nale y rozlać miarowo (po 25ml) do jałowych płytek
Petriego
c. po zastygnięciu nale y przenieść płytki z podło em do lodówki na 30 min.
d. w zestalonym elu wycinamy otworki o
średnicy
4mm (oddalone od siebie co
najmniej o 4cm)
e. wlewamy do wyciętych dołków po 50µl roztworów wzorcowych (I, II, III) o znanym
stę eniu lizozymu (rozcieńczenia lizozymu jaja kurzego) do kolejnych dołków po
50µl surowic badanych
f. inkubujemy test 24 h w komorach wilgotnych w temp 37°C
g. po inkubacji odczytujemy strefy przejaśnienia wokół dołków i z krzywej standardowej
odczytujemy stę enie lizozymu w badanej próbie
3.
Oznaczanie stę enia składowej C3 dopełniacza w surowicy metodą immunodyfuzji
pojedynczej radialnej
Zestaw zawiera płytki wypełnione elem agarozowym zawierającym przeciwciała
skierowane przeciwko białku C3 dopełniacza oraz standardy o ró nym stę eniu
składowej C3 dopełniacza (Ref. I, Ref. II, Ref. III) do dołków w elu nakrapiamy po 10µl
standardów (Ref. I, Ref. II, Ref. III) oraz badanych surowic (A, B, C).
Po nakropieniu płytki nale y inkubować w komorze wilgotnej.

Plik z chomika:

Inne pliki z tego folderu:

Inne foldery tego chomika:

Zgłoś jeśli naruszono regulamin